Amerika’ya yerleşen ikinci kolonidir. 1587’de North Carolina açıklarındaki Roanoke Adasına yerleşmişler ve 1590 yılında arkalarında hiçbir iz bırakmadan ortadan kaybolmuşlardı. Bu kayboluş hakkında çeşitli teoriler üretilmiş olsa da bu koloniye ne olduğu hakkında kesin bir bilgi yoktur.
1585 yılında Sir Walter Raleigh tarafından gönderilen 100 kişi Roanoke Adasında ilk İngiliz kolonisini kurmuşlardı. Raleigh bu adanın İspanyollarla savaşacak olan İngiliz savaş gemileri için mükemmel bir liman olduğunu düşünmüştü. Gemilerin onarımını burada yapabilir, eksik cephane ve gıdaları tamamlanan gemiler savaşa tekrar dönebilirdi. Ama plan başarılı olamadı. Topraklar hem yerlilerin hem de yerleşen kolonilerin ihtiyaçlarını karşılayacak kadar verimli değildi. Üstelik adaların çevresindeki suların sığlığı gemilerin adaya yeterince yaklaşmasını engelledi. Böylelikle koloniler ertesi yıl İngiltere’ye geri dönme kararı aldılar. Bu sırada Raleigh adaya yeni bir koloni göndermişti. Yeni grup ilk yerleşen kolonistlerin ayrılmasından birkaç gün sonra adaya ulaştıklarında 15 kişi hariç herkesin İngiltere’ye dönmüş olduğunu gördü.
1587 ilkbaharında Raleigh adaya yeni bir koloni gönderdi. Fakat gemiler daha kuzeydeki Chesapeake Körfezi yakınlarına doğru hareket ettiler. Gemidekiler Roanoke adası yönünde başka bir limana yerleşmek istediler ancak donanma komutanı bunu kabul etmeyip kolonistleri Roanoke adasına yerleştirdi. Koloni lideri John White -kendisi adaya ilk yerleşen İngiliz kolonisindendi- 1587 Ağustosunda İngiltere’ye malzeme tedariki için geri döndü. Fakat devam eden savaş adaya dönüşünü 3 yıl geciktirdi. 1590 yılında adaya geri dönen White ailesi ve yüz kadar kolonist tarafından karşılanmayı beklerken koloninin terk edilmiş olduğunu gördü.
Rastladığı tek ipucu bir ağacın üzerine kazınmış olan “Croatoan” kelimesi oldu. Croatoan adanın güneyinde yaşayan ve kolonistlere dostane davranan yerlilerdi. Kolonistlerin kaybolmasıyla ilgili iki teori üretildi.
İlki; en başında Chesapeake körfezine yerleşmek isteyen kolonistlerin buraya hareket ettikleri ve yerlilerin direnişi ile karşılaşıp öldükleriydi.
Diğeri ise kuzey Carolina’daki diğer yerlilerin entegre oldukları.
Kolonistlere ne olduğu hala bilinmiyor.
